脑组织组化实验
1. 灌注固定用的针头,一般都用注she针头。灌注大鼠一般可用 10 到 12 号针头,小鼠可用 6、7 号针头,但很重要的一点是要把针头的磨钝而不是用锐利的针头。
2. 关于穿刺:灌注大鼠时要把穿刺针的插入到升主动脉内,但不宜进入升主动脉过长,在动脉内见到针头或插入约 1mm 左右即可;灌注小鼠时只要把针头插入左心室内即可,不必要插入到升主动脉内。操作的要点是:,操作要迅速,剪开膈肌后,迅速沿腋前线剪开胸壁,并把胸前壁往上翻,暴露心脏;第二,一定要在明视野下操作,要剪开心包壁层的前壁,暴露升主动脉和肺动脉干的根部,确保穿剌针能进入升主动脉;第三,穿刺之前要用适当大小的血管钳夹住心室以固定心脏,但不要夹得过紧,要让心腔内留有一定的间隙,然后在心尖处轻轻旋转针头插入穿刺针。也可以用小剪刀在心尖处先剪开一个小口再插入穿刺针;第四,穿刺方向要正确,从心尖部开始,从左下方斜向右上方,若遇阻力要改变方向再试,不要用力蛮插。
3. 灌注用生理盐水的量大鼠用 50ml 左右,小鼠用 10ml 左右,一般以从右心耳流出的液体清亮为标准;4% 多聚甲醛用量约相当于老鼠体重,如 300 克的老鼠用 300ml 左右。小鼠一般用 20-30ml。灌注速度先快后慢,可持续 1-2 个钟头,也可以稍快。取脑后置脑块于 4% 多聚甲醛内 4 度后固定 4-6 个钟头。
脓毒症动物模型构建方法总结脓毒症:
是一种严重的全身性炎zheng反应综合征,是由感ran引起的机体免yi系统过度ji活和炎zheng反应失控的疾病。免yi系统反应过于激烈,导致炎zheng反应泛滥,从而引发全身性炎zheng反应综合征。
常见脓毒症造模方法:
1.细菌感ran:通过注射细菌或其产生的细菌毒su来诱导脓毒症模型。常用的细菌包括大肠杆jun、金黄色葡萄球jun、肺yan克雷伯菌等。
2.LPS诱导:脂多糖(LPS)是细菌外膜中的主要成分,具有强烈的mian疫ji活作用。可以通过注射LPS来诱导炎zheng反应和脓毒症模型。常用的给药途径包括静脉注射、腹腔注射或气道暴露。
简单介绍Agomiragomir的使用需要注意以下几点:•agomir的设计需要参考miRbase数据库中的微RNA序列,选择合适的靶基因和靶组织。•agomir的剂量和给yao方式需要根据实验目的和动物模型进行优化,一般建议从低剂量开始逐步增加,观察效果和副作用。•agomir的效果持续时间一般为1周以上,甚至可达5-6周,因此需要合理安排实验时间点和取样方式。•agomir的使用需要配合相应的负对照(negative control),即没有靶基因结合位点的随机序列修饰物,以排除非特异性效应。•agomir的使用需要结合其他方法进行验证,如RT-qPCR、Western blot、免mian疫组化等,以评估微RNA和靶基因表达水平的变化。